肉的宰后嫩化核心归因于肌原仟维形式的损坏，肌原仟维形式是由内源性核球淀粉酶质酶溶解酶吸附肌原仟维和癌神经元系骨架核球淀粉酶质酶引致的。与一百多年来一支是加关注端点的钙核球淀粉酶质酶酶与众不同，胱天核球淀粉酶质酶酶（caspases）在最近这一段时间形成感喜好一段话题。胱天核球淀粉酶质酶酶在癌神经元系凋亡的审理的阶段起着尤为重要性的用处，这当中caspase-3在人死后核球淀粉酶质酶溶解中的用处是各个面和繁琐的，故此最该进一个步骤探究浅析方案。S-亚硝基化完成调钙放、卡路里消化吸收、核球淀粉酶质酶质吸附和癌神经元系凋亡来调口感，收录嫩度和持水技能。开始的时候探究浅析方案会发现S-亚硝基化是可以调整依懒线粒体的caspase-3级联化学反应，这能够是肌肉群癌神经元系凋亡和牛肉片质量變化的缘故。caspase-3的探究浅析方案着重是其与癌神经元系凋亡的的关联，但是，好少有探究浅析方案浅析S-亚硝基化调caspase-3的新机制。

2024年9月由成都占农业的大部分二本大学张万刚讲师管理团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物技术为该研究提供了亚硝基化呈现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

2英文大标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

刊物：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2023年不良影响要素：5.7

投稿时长：2024年9月

加盟商部门：南京农业大学

研究探讨原料：蛋白

拜谱能提供技术性：亚硝基化修饰组学

工艺路经：

一、探索可是

01.Caspase-3活力

当今尚不清析NO对caspase-3的抑设计制的作用的作用能否归因于NO介导的S-亚硝基化，有所差异浓硫酸浓度梯度方向的GSNO对于外源性NO提供，以诱导型caspase-3的身体S-亚硝基化。然而取决于，与都没有GSNO的组相对于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3生物正相关大大减少（图1），与此前有关报道高度。GSNO操作大大减少caspase-3生物的隐藏的的原因仍亟待相一致。

图1 的不同溶度的GSNO处置对caspase-3几丁质酶的关系

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化的程度

科研Caspase-3的亚硝基化成度，以展现GSNO对Caspase-3的现象性。经GSNO外理后，探测到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化力度加剧（图2）。这部分成果反映出，外源性GSNO塑造可成功创业引发caspase-3的休外S-亚硝基化。另人震惊的是，在没得GSNO具有的照表组中探测到一款 忽闪的S-亚硝基化带，这反映出caspase-3可能出现内源性的S-亚硝基化。虽然，本科研中caspase-3的S-亚硝基化成度较高，而caspase-3的可溶性减低，这与已经的科研一样。那么，caspase-3的非特异聊天S-亚硝基化装饰位点尚不明了，还需要进一步明确骤的找寻。

图2 GSNO净化处理对caspase-3S-亚硝基化能力的的影响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化遮盖组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的回文回文序列。海蓝标上图片的回文回文序列指出S-亚硝基化肽，黑色标上图片的C指出S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3生物降解结血清

结血清是其中一种注重的的体细胞核骨架血清，在保护肌体细胞核组成部分的组成部分完善性和收縮性个方面起着重点要的的作用，探究S-亚硝基化caspase-3对结血清挥发塑料的太确定性认识更具注重的实际意义。与Std（未用胱天血清酶-3和GSNO孵育的默认值肌黏胶棉纤维血清）组想必，0 μM GSNO组（肌原黏胶棉纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的完善结血清含磷量相关系数拉低，信息提示caspase-3对结血清更具潜在的的血清水解反应作用。在GSNO孵育后，完善结血清的含磷量特别增长（P < 0.05）。前者，当GSNO浓度值偏高时，完善结血清的含磷量将持续上浮（P < 0.05）（图5）。某一看到反映出，SNO呈现的caspase-3以水准信任的习惯克制结血清的挥发塑料。

图5.S-亚硝基化caspase-3吸附结血清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3溶解肌钙蛋白质-T

肌钙球核淀粉酶-T (TnT)是原肌球球核淀粉酶自动的调节复杂背部肌肉缩小的细细的的必须肌原植物合成钎维球核淀粉酶。TnT的化学吸附塑料的特点是检则工具到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化状态下，caspase-3对TnT的化学吸附塑料现状如图甲如图是6如图是，与Std组（中含caspase-3和GSNO的肌原植物合成钎维）相较于，caspase-3组中30 kDa TnT段落相关系数加大，体现了caspase-3参于了TnT的化学吸附塑料，再者，caspase-3与GSNO的孵育造成的30 kDa TnT走低。在100和200 μM GSNO组范围内不会检则工具到显然的差距(P > 0.05)，而当GSNO的质量浓度符合400 μM 时，该段落相关系数避免(P < 0.05)。许多看见体现了了SNO掩盖的caspase-3对TnT化学吸附塑料的促使目的。结球核淀粉酶和TnT是caspase-3的铭感底物，而GSNO工作大幅度影向caspase-3的活力性会造成的肌原植物合成钎维球核淀粉酶化学吸附塑料本事大幅度影向。以上所说，NO引发的S-亚硝基化需要用掩盖半胱氨酸残基来自动的调节caspase-3的活力性，最后进每一步影向其对结球核淀粉酶和TnT的球核淀粉酶水解反应本事，最后影向鸡肉质量。

图6. S-亚硝基化caspase- 3光降解肌钙蛋清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本探究为了更好地探究S-亚硝基化对caspase-3遮盖的影晌和其其次对鸡肉肌原合成纤维素身体光降解的影晌。核血清质S-亚硝基化能够 遮盖caspase-3的半胱氨酸残基，进而造成caspase-3活性酶下降，进一个步骤促使了其对鸡肉肌原合成纤维素核血清质的核血清质淀粉水解学习能力。

三、拜谱工作小结

科研应用了酶活测定法，亚硝基化绘制组学分享，WB等查重技术手段，发展蛋清S-亚硝基化可绘制caspase-3的半胱氨酸残基，这诱发了caspase-3化学活化的削减，相结1步治理和改善了其对牛肉片肌原食物纤维蛋清的蛋清油脂水解本事。本科研为定义蛋清质亚硝基化对肉嫩的控制共识机制出具了一大个新的第一人称。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的蛋清质组学、体现蛋清质组学、产生组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸系列表产品设备，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺碱化、total空气氧化回归、分离巯基，欢迎大家咨询！

考生期刊论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663